那么使用RosetteSep™进行实验，是否会很复杂呢？当然不是！一起来看看我们的实验步骤吧：

1. 确保血液样本，PBS+2% FBS（磷酸盐缓冲液+2% 胎牛血清）和密度梯度离心液，均在室温（15-25℃）放置和离心。

2. 在样本中加入RosetteSep™抗体并混合均匀。

3. 在室温孵育20分钟。

4. 用等体积的PBS+2% FBS稀释样本并轻轻混匀。

5. 将稀释的样本加于密度梯度离心液之上（推荐使用的样本和密度梯度离心液体积请见表1；请注意尽量避免密度梯度离心液和样本混在一起）。

表1. 推荐的体积和试管容量

6. 在室温1200g离心20分钟，关闭刹车。

7. 从密度梯度离心液和血浆之间的界面收集富集的细胞。

8. 有时会较难分辨中间界面的细胞层，特别是在富集稀有细胞时；在这种情况下，可将部分密度梯度离心液和富集的细胞层一同取出以最大化回收率。

9. 加入PBS+2% FBS，300g离心10分钟，刹车档位放在低速，弃去上清；重复此步骤。（请注意：我们推荐使用氯化铵来去除样本残余的红细胞，来避免红细胞对下游分析或流式检测的干扰；氯化铵裂解可在其中一个洗涤步骤中进行。）

10. 获得的富集细胞可用于您的下游应用。

简单来说，看图！（点击图片可查看大图）

以上为通常使用的实验步骤。那么针对一些特定的细胞类型呢？

NK细胞和白细胞的高通量分选步骤

传统的从血液中分选白细胞的方法耗时耗力，并需要细致和专业的操作。通常需先使用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞（PBMCs），然后使用基于分离柱的免疫磁珠分选系统来进行细胞亚群的富集。使用这些传统方法，从450ml血液中分选高纯度的自然杀伤细胞（NK细胞）操作过程漫长（最长需4小时），并且使用这些方法很难较快且高效地处理多个样本1。

新的RosetteSep™和SepMate™体系可以更快更高效地处理血液样本，且不会损伤细胞在下游分析中的功能或性能。马里兰大学医学院的Ajay Jain教授和他的同事在日常工作中，需要从大量的人源样本中分选NK细胞。为了简化工作流程并实现高通量的样本处理，Jain教授的实验室采用了新的RosetteSep™和Sepmate™细胞分选体系来取代他们以前使用的分选柱方法。
如需要详细的实验方法，请参阅Journal of Immunological Methods上的文献1。

参考文献

 

1. So E.C et al. (2013) A high throughput method for enrichment of natural killer cells and lymphocytes and assessment of in vitro cytotoxicity. J Immunol Methods 394(1–2): 40–48.